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《食品安全導刊》刊號:CN11-5478/R 國際:ISSN1674-0270

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膠體金試紙條在肉類食品中禁用獸藥殘留檢測中的應用

2018-05-01 14:16:18 來源: 食品安全導刊

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講師介紹:
    張勛,江蘇美正生物科技有限公司研發總監,江蘇大學碩士、江南大學博士及博士后,從事食品安全快速檢測相關研究及產業化工作11年,熟悉小分子抗原合成與鑒定、多抗制備、單克隆抗體制備、前處理方法開發、免疫層析、ELISA、理化檢測產品開發等相關技術領域。
   □  梁文文 本刊記者     
    中國是世界第一的肉類生產大國,肉類食品在生活中也是必不可少的食物來源。近年來,我國肉類消費占比進一步上升,同時肉類食品問題事件也越來越突出。屢被曝光的肉類食品安全問題對人體健康、動物疾病防控以及生態環境等造成了很大危害,也造成了我國動物性食品出口他國的限制。在3月22日舉辦的“肉類食品安全的保障與控制網絡研討會”上,來自江蘇美正生物科技有限公司的研發總監張勛對肉類食品的獸藥殘留進行了講解,旨在提高肉類食品中獸藥殘留的檢測水平,加強我國肉類食品安全監管,使我國肉類食品生產和消費體制不斷健全、完善,保障人民生活中的食品安全。
   
常見的快速檢測產品形式
    從事食品安全檢測的人都知道常見的食品安全檢測方法——儀器方法和快速方法,研討會上,張勛主要介紹了快速檢測。快速檢測方法從檢測原理上看,可分為基于理化性質的檢測和基于免疫學的檢測,其中免疫學方法主要是利用抗原抗體的特異性結合建立的方法,目前產品使用較多的方法有ELISA、免疫層析等。
    酶聯免疫(ELISA)產品檢測靈敏度高,但檢測過程中需要經過洗板、多次加液等多個步驟,檢測過程還需要使用一定的儀器設備,如借助酶標儀讀數。該檢測下限可達0.01μg/kg(ppb),單批樣本檢測時間為1~2小時,更適用于批量樣本檢測。膠體金產品有兩種類型——檢測卡和試紙條,這兩種形式的產品雖包裝不同,但檢測原理相同,均具有靈敏度高、檢測速度快、耗時短等優點,單個樣本檢測僅需5~10分鐘,結果可以直接目測,也可與讀數儀聯用,接入數據平臺系統,適用于現場快速檢測。
    儀器檢測和快速檢測各有優缺點,但兩者并不是對立的關系,因為其各自的適用范圍和條件不同。在實際應用中,最好的檢測模式就是使兩者相互配合,大量樣本初篩使用快速檢測,然后陽性或疑似陽性的樣本使用儀器檢測進行確證。
 
常見的禁用獸藥種類
    禁用獸藥的依據一般為(農業部)公告、法規、國家標準等,常見的禁用農藥有如下幾種。
    ①肉精類(β-興奮劑類)
    瘦肉精主要包括克侖特羅、沙丁胺醇、萊克多巴胺、西馬特羅、苯乙醇胺A、班布特羅、齊帕特羅、氯丙那林、馬布特羅、西布特羅、溴布特羅等。瘦肉精類膠體金產品較早用于食品安全快速檢測,同時也是使用量最大的產品之一,一般檢測限3-3-5μg/kg,目前已出現0.5μg/kg的產品。瘦肉精一般通過動物尿液和組織來進行檢測,在對尿液樣本進行檢測時要注意不同地區的動物和不同種類的動物其尿液基質會存在差異。
     ②氯霉素
    氯霉素很早就被我國列入禁止使用的范圍,儀器方法和膠體金方法檢測限均為0.1μg/kg,檢測精度較高,其在貝類、蜂蜜中檢出較多。值得注意的是,同類藥物中氟苯尼考在雞蛋中禁止檢出。
    ③硝基呋喃類
    硝基呋喃類物質是我國食品藥品監管部門比較重視的一類檢測物質,其原型藥在生物體內代謝迅速,但代謝產物和蛋白質結合相當穩定,故常利用代謝物的檢測來反應硝基呋喃類藥物的殘留狀況。儀器方法和膠體金方法檢測限均可達到0.5μg/kg,膠體金方法中使用消線法比使用比色法判讀優勢更加明顯。
    ④孔雀石綠
    孔雀石綠是一種有毒的三苯甲烷類化學物,并不是所有的肉類食品中都有,其常見于水產品之中,但近年來被多次通報,屢禁不止。膠體金方法檢測限均可達0.5μg/kg,與儀器方法保持統一水平。一般禁用獸藥有兩個特點,一是有毒性、危害大,另一個是在體內殘留時間長,而孔雀石綠就是這樣一種物質。有文獻中提到室內模擬實驗發現水體中LMG初始濃度為1 ng/mL,兩個月后在羅非魚肌肉中的積累濃度高達60 ng/g。
 
    ⑤硝基咪唑類
    硝基咪唑類物質包括甲硝唑(Metronidazole)、地美硝唑(Dimetronidazole)及其鹽、酯及制劑,具有致突變性和潛在的致癌性,被許多國家列為違禁藥物。農業部公告第193號規定不準以抗應激、提高飼料報酬、促進動物生長為目的在食品動物飼養過程中使用。儀器方法檢測限為0.2μg/kg,定量限1.0μg/kg,膠體金檢測限目前可以做到0.5μg/kg。
    ⑥喹乙醇代謝物MQCA
    喹乙醇代謝物MQCA是2017年“3·15”晚會曝光的藥物,被稱為“新型瘦肉精”。農業部公告第168號中規定:喹乙醇只能用于體重低于35千克的豬,飼料中添加量不得高于50 ppm,禁止用于家禽及水產養殖。藥典辦[2017]14號,建議停止氨苯砷酸、洛克沙胂和喹乙醇用于動物促生長;2015版獸藥典沒有收錄喹乙醇代謝物MQCA。儀器方法和膠體金方法檢測限均可達到0.5μg/kg,另外江蘇美正專門開發了免疫親和柱配套的儀器方法,回收率更穩定。
    ⑦喹諾酮類/磺胺類
    喹諾酮類/磺胺類中部分藥物為禁用,同時也是歐美主要關注的藥物之一,出口企業應多加重視。相對于組織類樣本,蛋雞禁用較多,因此雞蛋中限制更嚴格。此類快速檢測產品大多數是識別一類藥物,因此與實際的需求可能有誤差,用戶需要理解交叉反應的含義,針對自己的需求權衡。檢測時,一般多采用水性溶液提取,氮吹方法要注意某些藥物的回收率可能不夠好。
    ⑧其他項目
    除以上主要禁用藥物外,還有抗病毒類藥物、激素與蛋白同化類藥物、精神鎮靜類藥物等,需要注意的是針對雞蛋或者牛奶,禁用的藥物種類會有所不同。
常見問題及注意事項
    無論是儀器檢測還是快速檢測,首先要注意污染問題,因為污染無處不在,又難以發現,常常被人們忽視。此外,看似不經意的動作,往往會造成很大誤差,通常只有經驗豐富的操作員才能避免或分析其發生的原因。常見的污染有操作人員使用的化妝品、記號筆、人用藥物等。化妝品中常見的污染物質為氯霉素、磺胺、喹諾酮、四環素類藥物;人用藥常帶來的污染有頭孢類、阿奇霉素、金剛烷胺等;記號筆含有較高含量的孔雀石綠,在檢測孔雀石綠時應盡量避免記號筆的使用。與此同時,采樣環節的操作細節也會對后續檢測帶來影響,所以一定要有良好的操作習慣,避免污染源的帶入。
    其次,需要注意的事項還有操作的濕度和溫度,因為溫度和濕度過高或過低都會影響測量的準確性,一般要求在室溫下操作(25℃左右)。產品打開之后應盡快使用,或在產品要求的時間內使用,否則產品將失效,檢測結果也會變得毫無意義。判讀時間、方式也應詳細閱讀說明書,根據要求進行操作。
    對于快檢產品有一個很重要的環節就是產品的驗證,因為快檢產品是用來衡量某一物質的“標尺”,所以本身要準確。一般大廠家的產品在出廠前會經過質控,然而一些小公司的產品沒有完整的質控環節,用戶如果有條件的話,最好能自己準備一些標準品,進行驗證。
快速檢測發展的方向
    快速檢測的發展方向呈現以下幾個特點。首先,產品和技術種類越來越多,尤其是禁用藥物,雖然相關法律法規對禁用藥物的要求比較嚴格,但目前快檢產品種類還不能覆蓋全部的禁用獸藥,因此需要進一步開發新項目相關的靈敏度高的抗體,以改善目前存在的問題。現在檢測限達不到要求的會進一步提高檢測限,已經有產品的比色法判讀改進成消線法判讀等。相信隨著技術的發展和對其研究的深入,快檢產品的應用匯越來越多。
    其次是出現了更多的標記材料,如熒光、上轉化、磁珠等,需提醒用戶的是不要過度迷信新技術,滿足檢測需求是最基本的要求,根據自己的需求選擇合適的產品即可。在選擇時,可依據產品檢測限、穩定性、檢測成本、檢測效率進行選擇。目前膠體金的應用較多,大多需求也都能滿足,且技術成熟,產品穩定性較好,新材料可作為膠體金的補充。
    目前市場上也出現了越來越多的更靈敏的識別原料,使用較多的是單克隆抗體,其穩定性好,批間差異性小。另外還有適配體、受體等,這些原料在研究中較為常見,但應用中較少。使用的較多的仍然是抗體,所以抗體也是衡量一個公司的關鍵,可以說是核心技術。
    今后,快速檢測產品的優化還會從更快速的前處理方案、多合一的檢測方案、自動化等方面著手,提高產品的檢測效率,解放檢測人員的雙手。
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