高效液相色譜法測(cè)定保健食品中 一新型他達(dá)拉非類(lèi)似物的含量

　　

　　楊麗蓉12，趙海鵬2，齊衍超2，陳 燕2，楊 釗1.3

　　

　　（1.青島大學(xué)藥學(xué)院，山東青島 266071;2.濰坊市檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東濰坊 261000;

　　

　　3.青島市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東青島 266071）

　　

　　摘 要∶目的∶應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定了保健食品中非法添加的一新型他達(dá)拉非類(lèi)似物（ 3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非）的含量。方法∶采用島津 Shim-pack GIST C1。色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相A為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙

　　

　　腈（60∶20 ∶20），流動(dòng)相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙腈（8;46;46）、梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，結(jié)果·3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非濃度在11.53～92.24μg/mL范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好（r=1.000 0），平均回收率（n=6）為99.08??結(jié)論∶建立了保健食品中3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非含量測(cè)定的方法。

　　

　　關(guān)鍵詞∶3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非;保健食品;HPLC

　　

　　近年來(lái)，部分不法分子將磷酸二酯酶5抑制劑 (Phosphodiesterase 5, PDE-5)類(lèi)化合物非法用于提高免疫 力、緩解體力疲勞的保健食品中，以獲取暴利叫這類(lèi)非法 添加的化學(xué)物質(zhì)若長(zhǎng)期使用，非但起不到強(qiáng)身健體效果，甚 至?xí)p害人體健康[2]«國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的現(xiàn)行 檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)中涉及11種PDE-5選擇性抑制劑[3],為規(guī)避檢査, 不法生產(chǎn)者釆取添加標(biāo)準(zhǔn)外的物質(zhì)囹。

　　

　　本文釆用HPLC-DAD進(jìn)行緩解體力疲勞類(lèi)保健食品中 非法添加篩査時(shí)，發(fā)現(xiàn)有1個(gè)未知結(jié)構(gòu)的他達(dá)拉非類(lèi)似物， 經(jīng)過(guò)正相硅膠薄層色譜分離純化得到目標(biāo)物后，用HPLC- MS/MS得到其相對(duì)分子質(zhì)量和結(jié)構(gòu)碎片，結(jié)合高分辨質(zhì)譜、 核磁共振氫譜數(shù)據(jù)及文獻(xiàn)資料電經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比確認(rèn)，最終 鑒定了 目標(biāo)物的結(jié)構(gòu)為 6-(benzo[d][ 1,3]dioxol-5-yl)-2-(3- hydroxypropyl)-2,3,6,7,12,12a-hexahydropyrazino[ 1, 2，:1,6] pyrido[3,4-b]indole-l,4-dione(結(jié)構(gòu)式如圖 1 所示)。本實(shí) 驗(yàn)釆用高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)保健食品中該物質(zhì)的定量 檢測(cè)。

　　

　　1資料與方法

　　

　　1.1 一般資料

　　

　　高效液相色譜儀(Ultimate3000型，Thermo)；超聲波 清洗器(KQ-700VDE型，昆山超聲儀器有限公司)；XSE- 205DU 電子天平(METTLER TOLEDO )»

　　

　　甲醇(色譜純)，乙臘(色譜純)，三乙胺(國(guó)藥集團(tuán)化 學(xué)試劑有限公司，99.0%),磷酸(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限 公司，85.0%) , 3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非對(duì)照品(加拿大 TLC藥物標(biāo)準(zhǔn)品有限公司，商品名：Tadalafil Impurity 37, 純度：99.4%)；保健食品(批號(hào)：20190425)為濰坊市奎文 區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局提供的樣品。

　　

　　1.2方法

　　

　　1.2.1色譜條件

　　

　　Ultimate3000型高效液相色譜儀，色譜柱：島津Shimpack GIST Ci8 色譜柱(4.6 mmx250 mm, 5 gm)；進(jìn)樣量： 10 gL；柱溫：35 °C；檢測(cè)波長(zhǎng)：230 nm,二極管陣列檢測(cè)器； 流動(dòng)相A為磷酸三乙胺溶液(取三乙胺7 mL用水稀釋至 1 000 mL,用磷酸調(diào)pH至2.8)-甲醇-乙臘(60 : 20 : 20), 流動(dòng)相B為磷酸三乙胺溶液-甲醇-乙臘(8 : 46 : 46), 梯度洗脫；1 - 12 min,流動(dòng)相A為100%； 25?30 min, 流動(dòng)相B為100%； 31?36 min,流動(dòng)相A為100%；流速： 1.0 mL/mino

　　

　　1.2.2溶液的制備

　　

　　(1)供試品溶液制備。精密稱(chēng)取lg供試品，置于50mL 容量瓶中，加甲醇適量，超聲處理15 min,用甲醇稀釋至刻度， 搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液即得。

　　

　　(2)對(duì)照品溶液制備。精密稱(chēng)取3-羥丙基去甲基他達(dá)拉 非對(duì)照品9.28 mg(純度為99.4%),于100 mL容量瓶中，加 甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成質(zhì)量濃度為92.24 ng/mL 的對(duì)照品溶液。

　　

　　2結(jié)果與分析

　　

　　2.1線(xiàn)性關(guān)系

　　

　　精密吸取1.2.2 (2)對(duì)照品溶液2.5 mL、5.0 mL, 10.0 mL 和15.0 mL,分別至20 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度， 按“1.2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，以濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為 縱坐標(biāo)，計(jì)算得線(xiàn)性方程為Y=33.677X+14.4，r=1.0000，,表 明3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非濃度在11.53?92.24 ug/mL范 圍內(nèi)與峰面積呈良好線(xiàn)性關(guān)系。

　　

　　2.2精密度試驗(yàn)

　　

　　取同一供試品溶液，按“121”項(xiàng)下色譜條件下連續(xù)進(jìn) 樣6次，3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非含量的RSD為0.3%。

　　

　　2.3加樣回收率試驗(yàn)

　　

　　精密稱(chēng)取已知含量的同一批保健食品(20190425)6份各 0.5 g,分別加入3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非對(duì)照品溶液10 mL (濃度為0.115 3 mg/mL)按1.2.2 (1)制備供試品溶液，按 “1.2.1”色譜條件進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)行回收率考察，平均回收率為 99.08%, RSD為1.10%(戶(hù)6),表明本方法測(cè)定3-羥丙基 去甲基他達(dá)拉非準(zhǔn)確率較高(表1)。

　　

　　2.4樣品含量測(cè)定

　　

　　按1.2.2 (1)方法制備供試品溶液，按"1.2.1”項(xiàng)條件進(jìn) 行測(cè)定，計(jì)算3-羥丙基去甲基他達(dá)拉非的含量，20190425 號(hào)樣品含量為2.12mg/g。

　　

　　3討論與結(jié)論

　　

　　本實(shí)驗(yàn)針對(duì)最新發(fā)現(xiàn)的一種新型他達(dá)拉非衍生物3-羥 基丙基去甲基他達(dá)拉非，釆用高效液相色譜法實(shí)現(xiàn)了對(duì)保健 食品中該物質(zhì)的定量檢測(cè)。該方法填補(bǔ)了現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)對(duì)保健食 品中非法添加該物質(zhì)檢測(cè)的空白，為完善食品中非法添加化 學(xué)藥品數(shù)據(jù)庫(kù)，保障人們飲食安全提供了技術(shù)支持。

　　

　　參考文獻(xiàn)

　　

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