王棋棋

(中紡檢測(福建)有限公司，福建泉州 362200)

摘　要：為了解反相高效液相色譜法在食品中防腐劑和甜味劑測定中的應(yīng)用情況，本文采用C18色譜柱，建立了反相高效液相色譜法測定食品中防腐劑和甜味劑的方法體系。檢測器在210 nm波長、230 nm波長位置分別檢測出糖精鈉與阿斯巴甜、山梨酸與安賽蜜，脫氫乙酸色譜峰出現(xiàn)在293 nm檢測波長條件下。結(jié)果表明，在利用反相高效液相色譜法測定食品中防腐劑和甜味劑時(shí)，各組分質(zhì)量濃度處于1.0～100.0 μg/mL可達(dá)到最佳線性關(guān)系，且精密度與準(zhǔn)確度較高。

關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法;食品;防腐劑;甜味劑

食品中防腐劑和甜味劑的存在，對食品品質(zhì)、口味有直接的影響，也是食品安全管理至關(guān)重要的內(nèi)容。測定食品中防腐劑和甜味劑的含量及類型，是食品安全管理的依據(jù)。反相高效液相色譜法測定食品中防腐劑和甜味劑，該方法具有準(zhǔn)確性好、樣品前處理簡單、精密度高的優(yōu)良特點(diǎn)。根據(jù)食品中防腐劑和甜味劑的測定要求，探究反相高效液相色譜法的應(yīng)用非常必要。

1　材料與方法

1.1　試劑與設(shè)備

在測定前，準(zhǔn)備食品添加劑標(biāo)準(zhǔn)品，主要為糖精鈉、阿斯巴甜、山梨酸、安賽蜜等。同時(shí)準(zhǔn)備92 g/L亞鐵氰化鉀溶液、183 g/L乙酸鋅溶液、0.02 mol/L的乙酸銨溶液[1]。

日本島津帶He脫氣裝置的高效液相色譜儀;國產(chǎn)電動(dòng)離心沉淀劑;帶二極管陣列的檢測器;感量為0.001 g的電子分析天平;轉(zhuǎn)速大于8 000 r/min的離心機(jī);渦旋振蕩器;超聲波清洗儀[2]。

1.2　實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1　測定條件

流動(dòng)相溶劑A為0.02 mol乙酸銨溶液，由超聲后二水乙酸220 g與500 mL水加入30.0 mL冰乙酸后定容至1 000 mL配制;流動(dòng)相溶劑B為甲醇，色譜純[3]。梯度洗脫程序?yàn)椋?.0%甲醇，1.0～0.8 mL/min，0～5 min;設(shè)定初始濃度為5.0%溶劑B和95.0%溶劑B，糖精鈉、脫氫乙酸出峰時(shí)間相同，色譜峰單獨(dú)積分計(jì)算難度大，可以調(diào)整為10%溶劑B+90%溶劑A，流速為0.8～1.0 mL/min，洗脫時(shí)間為5～20 min。由于阿斯巴甜在5.0%溶劑B和95.0%溶劑B洗脫時(shí)，出峰時(shí)間延后，影響了分析效率，在20.0 min后，可以調(diào)整流動(dòng)相比例為38%溶劑B+62%溶劑A，流動(dòng)速度為1.0 mL/min，洗脫時(shí)間為20～40 min。山梨酸在洗脫比例為5.0%溶劑B和95.0%溶劑B，且流動(dòng)速度為1.0 mL/min時(shí)，與樣品中其他干擾雜峰分離，可以在洗脫時(shí)調(diào)整洗脫時(shí)間范圍為40～48 min。

設(shè)定在230 nm波長下進(jìn)行安賽蜜、山梨酸測定，在210nm波長下進(jìn)行阿斯巴甜、糖精鈉測定，在293 nm波長下進(jìn)行脫氫乙酸測定。同時(shí)設(shè)定檢測器柱溫為37.0～39.0 ℃，進(jìn)樣量為10 μL，靈敏度為0.08 aufs[4]。

1.2.2　樣品處理

對于醬油等液體樣品，直接取樣并加水稀釋20倍，以50%氨水調(diào)節(jié)酸堿值至中性偏弱堿性。調(diào)節(jié)酸堿值后進(jìn)行超速離心，取上清液備用。

含二氧化碳、酒精的軟飲料，需要取10.00 g加熱后去除二氧化碳、酒精，放入50 mL比色管內(nèi)用水定容并經(jīng)濾膜過濾，濾膜孔徑為0.45 μm。

對于醬菜、果脯等固體樣品，切碎后混合均勻加入8.0 mL水，超聲30 min時(shí)后用水定容到10.0 mL，定容后經(jīng)0.45 μm濾膜過濾處理。餅干等基質(zhì)成分復(fù)雜的樣品，需要在利用石油醚脫脂處理的基礎(chǔ)上，粉碎并均勻混合，加入等量的2份水以及1份200 g/L硫酸鋅溶液和20.0 g/L氫氧化鈉溶液，超聲0.5 h后，用水定容到25.0 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過濾待測定[5]。

酸奶等固液混合樣，需將其混合均勻后加入100 g/L硫酸銨溶液以及等量的兩份水，超聲30 min后，用水定容到10.0 mL經(jīng)0.45 μm濾膜過濾處理備用。

2　結(jié)果與分析

2.1　定量測定結(jié)果

依據(jù)前述測定條件，對前期處理完畢的樣品進(jìn)行測定，得出結(jié)果為：可樂含安賽蜜12.5 mg/kg;酸奶中糖精鈉含量為155.2 mg/kg，山梨酸含量為112.3 mg/kg，阿斯巴甜含量為936.5 mg/kg、安賽蜜含量為35.1 mg/kg;餅干含阿斯巴甜61.3 mg/kg;醬菜含安賽蜜32.6 mg/kg;果脯含阿斯巴甜32.6 mg/kg，安賽蜜含量為469.5 mg/kg;醬油含脫氫乙酸123.5 mg/kg。重復(fù)測定6次后，得出測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在3.5%～8.5%，準(zhǔn)確度較高。

2.2　線性范圍與相關(guān)系數(shù)

對反相高效液相色譜法進(jìn)行方法學(xué)考察驗(yàn)證，其中山梨酸標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在2.0～20.0 μg/mL時(shí)達(dá)到最佳線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 85，糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)線性范圍為0.0～100.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 98，脫氫乙酸在1.0～100.0 μg/mL時(shí)達(dá)到最佳線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.999 97，阿斯巴甜的標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在0.0～100.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.99978;安賽蜜的標(biāo)準(zhǔn)線性范圍在2.0～50.0 μg/mL，相關(guān)系數(shù)為0.999 45。

2.3　加標(biāo)回收率

利用電子天平稱取5.0 g醬菜、果脯、酸奶、餅干(油炸)、可樂、醬油各6分，添加糖精鈉、脫氫乙酸、山梨酸、安賽蜜、阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)物，添加量分別為50.0 μ g、150.0 μg、200.0 μg、500 μg，得到的最大回收率以及對應(yīng)的添加量、變異系數(shù)如表1所示。利用該方法對食品中山梨酸、脫氫乙酸等防腐劑以及糖精鈉、安賽蜜、阿斯巴甜等甜味劑進(jìn)行檢測，可以獲得準(zhǔn)確性較好的結(jié)果，滿足大批量食品防腐劑、甜味劑檢測要求。

3　結(jié)論

反相高效液相色譜法是一種準(zhǔn)確度高、分離度佳、精密度好和耗時(shí)短的定量分析方法，可以滿足食品中多種防腐劑和甜味劑的測定要求。在食品中防腐劑與甜味劑測定中，相關(guān)人員可以選擇反相高效液相色譜法，配合C18柱梯度洗脫，在200～293 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行檢測，可壓縮樣品檢測時(shí)間，提高樣品檢測效率。

參考文獻(xiàn)

[1]柏中波,王晶,張國瑩.反相高效液相色譜法聯(lián)合測定食品中多種防腐劑、甜味劑及富馬酸二甲酯[J].食品安全導(dǎo)刊,2018(24):122-123.

[2]尹霞,陳斌,王燕清,等.反相高效液相色譜法測定阿立哌唑中的有關(guān)物質(zhì)[J].中南藥學(xué),2021(6):1189-1194.

[3]覃芳,李廣勝,郭興輝,等.反相高效液相色譜法同時(shí)測定利肝寧片中對羥基苯乙酮和綠原酸的含量[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2021(4):833-837.

[4]劉東平,謝海燕.RP-HPLC法測定血漿中奧卡西平及其活性代謝物濃度[J].廣東化工,2021(10):231-233.

[5]馮光軍,羅丹,冉鳳英,等.反相高效液相色譜法測定參芪降糖膠囊中梓醇含量[J].中國藥業(yè),2021(9):63-65.