摘　要：目的是了解市售玉米制品和堅果制品中的黃曲霉毒素污染狀況。方法為結合免疫親和樣品前處理技術，采用高效液相色譜法測定市售玉米制品、堅果制品中的4種黃曲霉毒素。檢測了25份市售玉米制品和24份堅果制品，結果顯示，其中玉米制品的陽性率為36%，堅果制品中未檢出。結論得出，目前市售食品中黃曲霉毒素污染問題主要存在于玉米及其制品中，污染程度雖不高，但由于黃曲霉毒素的強烈致癌作用，還是應該引起重視。
關鍵詞：液相色譜法　黃曲霉毒素　檢測
    黃曲霉毒素（Aflatoxins，簡稱AFT）是由曲霉屬中的黃曲霉和寄生曲霉所產生的有毒代謝產物，目前已經發現的黃曲霉毒素有B1、B2、G1、G2、M1、M2等17種。1993年，AFT被世界衛生組織的癌癥研究機構劃定為一類致癌物^[1]。據估算，全世界每年約有25%的谷物受到霉菌毒素影響^[2]。近20年的監測數據表明，乳品等動物源性食品中黃曲霉毒素的污染率居高不下^[3]。隨著人們的食品安全意識不斷提高，黃曲霉毒素的檢測已經引起社會的廣泛關注和政府的高度重視，檢測方法將向簡便、快捷、靈敏度高的方向發展。黃曲霉毒素廣泛存在于霉變的玉米制品、花生制品、大米、堅果制品及乳制品等食品中，對人和動物均具有很強的致癌作用和毒性，是誘發肝癌的重要物質之一。為了解易受到黃曲霉毒素污染的食品中黃曲霉毒素的污染狀況，探討其對人體存在的潛在風險，本研究結合免疫親和樣品前處理技術及高效液相色譜法測定市售玉米制品、堅果制品中的黃曲霉毒素。
1 材料與方法
    1.1 儀器設備
    Agilent 1100液相色譜儀，熒光檢測器（G1321B FLD）；電動振蕩器：IKA調速多用振蕩器（KS 501）；漩渦振蕩器：IKA MS 3；固相萃取儀：SUPELCO。
    1.2 材料和試劑
    甲醇、三氟乙酸、正己烷、乙腈均為色譜純；黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2混合標準品(1μg/mL，Sigma公司)；黃曲霉毒素免疫親和柱（美國Beacon）。
    1.3 色譜條件
    色譜柱：4.6×250mm，5μm，C18；柱溫：30℃。
    流動相：乙腈-水，梯度洗脫，梯度條件見表1；流速：1.0mL/min。
    表1  梯度洗脫條件

時間/min	乙腈/（%）	水/（%）
0.00	15.0	85.0
6.00	17.0	83.0
8.00	35.0	65.0
14.00	25.0	75.0

 
    熒光檢測器：激發波長：360nm；發射波長：440nm；進樣量：25μL。
    1.4 樣品處理
    1.4.1 樣品提取及凈化
    將樣品打磨碎后準確稱取25.0g于250mL具塞錐形瓶中，加5.0g氯化鈉及甲醇-水（7+3）至125.0mL，用均質器高速攪拌提取2min。過濾后準確移取15.0mL濾液，并加入30.0mL水稀釋，用玻璃纖維濾紙過濾至濾液澄清，備用。移取15.0mL樣品提取液，按照免疫親和柱使用說明書，通過親和柱的凈化和濃縮。最后準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，收集洗脫液于試管中，供檢測使用。
    1.4.2 樣品衍生
    將試管中收集的洗脫液用氮氣吹干（在60℃下），加入200μL正己烷和100μL三氟乙酸，密閉混勻30s后，在40±1℃烘箱中衍生15min。氮氣吹干，準確加入200μL 85%乙腈，溶解，振蕩器上混勻，1000r/min離心15min，取上清液至自動進樣瓶中，供測定用。
    1.5 工作曲線的制備
    吸取適量的標準使用液，使其成一系列，60℃下氮氣吹干，注意氮吹要溫和，衍生化方法同1.4.2。
    1.6 樣品的測定
    黃曲霉毒素出峰順序為：AFTG1、AFTB1、AFTG2、AFTB2，以每種黃曲霉毒素標準系列的濃度對峰面積繪制標準曲線。試樣根據保留時間定性，根據峰面積定量。
2 結果
    2.1 黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2標準譜圖
    應用上述條件，分析了4種黃曲霉毒素混合標準品，黃曲霉毒素按照G1、B1、G2、B2的順序出峰，所得色譜圖如圖1所示。     2.2 方法的檢出限
    在本實驗條件下，取不同濃度的黃曲霉毒素混合標準溶液進行測定，以3倍信噪比計算目標物組分的檢出限量，B1、B2、G1、G2檢出限分別為：0.2、0.05、0.2、0.05μg/kg。
    2.3 方法的準確度和精密度
    在一份空白花生樣品中，分別加入0.05、0.10、0.25μg 3種濃度的B1、B2、G1、G2，各平行測定6次，進行準確度和精密度測定的實驗，結果見表2。其加標回收率在82.00％~94.47％之間，RSD在1.50％~6.45％之間。
    2.4 堅果制品中黃曲霉毒素檢測結果
    本項研究共采集并檢測了24份堅果制品，分別為開心果、杏仁、松仁等堅果類食品，所檢樣品均未檢出黃曲霉毒素B1、黃曲霉毒素B2、黃曲霉毒素G1、黃曲霉毒素G2。
    2.5 玉米粉（碴）中黃曲霉毒素檢測結果
    本項研究共采集并檢測了25份市售玉米制品，分別為干玉米粒、玉米粉、玉米片，均無霉變現象，共檢出9份樣品含有黃曲霉毒素，陽性率36%，其中一份樣品超出國家允許限量標準。 3 討論
    結果顯示，玉米制品的黃曲霉毒素污染情況較為普遍，36.0%的玉米制品受到黃曲霉毒素污染，4種毒素中以AFTB1陽性率和濃度最高，AFTB2、AFTG1和AFTG2依次降低，每種毒素的陽性率比前一種降低20%左右，變化比較平穩。4種黃曲霉毒素中，AFTB1的陽性率和濃度都最高，是AFTS的主要組成成分?？傮w而言，AFTB2、AFTG1和AFTG2的污染水平依次降低。
    本研究顯示，目前市售食品中黃曲霉毒素污染問題主要存在于玉米及其制品中，污染程度雖不高，但由于黃曲霉毒素的強烈致癌作用，還是應該引起重視。糧食收獲后，要加強保管，嚴格控制霉菌生長條件，嚴格防霉。改善貯藏條件，抑制霉菌生長。為保障食品安全，政府部門在做好田間管理的同時，還應加強日常的監督檢查，使抽檢監測工作穩定化、常規化、連續化，指導百姓安全食用，讓人們食得放心，食得健康。
參考文獻：
    [1] 勞文艷，林素珍.黃曲霉毒素對食品的污染及危害[J].北京聯合大學學報，2011，25(1):64-69．
    [2] 胡娜，許楊.組合實驗設計用于黃曲霉毒素污染控制的研究[J].糧食儲藏，2006(3):39-42.
    [3] 段文仲，呂紅英，龐津霞.動物源性食品中黃曲霉毒素污染控制研究[J].現代農業科技，2009(7):206-208.